Кальций-фосфатные бионы независимо от формы вызывают выделение интерлейкина-6 и интерлейкина-8 в культурах первичных артериальных эндотелиальных клеток

Аннотация

Актуальность. Кальций-фосфатные бионы (КФБ) формируются при перенасыщении крови ионами кальция и фосфора и, циркулируя в кровотоке, повреждают эндотелиальные клетки (ЭК), при растворении в лизосомах вызывая их лизосомально-опосредованную клеточную гибель, которая может сопровождаться выделением провоспалительных цитокинов в микроокружение.
Цель исследования. Оценить профиль секреции провоспалительных цитокинов первичными артериальными ЭК человека под воздействием сферических КФБ (СКФБ) и игольчатых КФБ (ИКФБ).
Материалы и методы. СКФБ и ИКФБ в равных концентрациях (100 мкл, оптическая плотность суспензии на длине волны 650 нм 0,08-0,10) были добавлены к конфлюэнтным культурам первичных ЭК коронарной и внутренней грудной артерии человека в 6-луночных планшетах. Культуральная жидкость забиралась после 24 часов культивирования с последующим измерением в ней уровня провоспалительных цитокинов (интерлейкин(ИЛ)-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-23, фактор некроза опухоли-α, γ-интерферон) посредством иммуноферментного анализа. Кроме того, из клеточной массы выделяли РНК посредством соответствующих колонок с последующей обратной транскрипцией для синтеза кДНК и оценкой экспрессии генов, кодирующих вышеуказанные цитокины (IL1B, IL6, CXCL8, IL10, IL12A, IL12B, IL23, TNF, IFNG) и некоторые рецепторы к ним (IL1R1, IL1R2, TNFRSF1A, TNFRSF1B), методом количественной полимеразной цепной реакции.
Результаты. Воздействие СКФБ и ИКФБ приводило к статистически значимому повышению экспрессии генов IL1B, IL6, CXCL8, IL12A и IL23, при этом ЭК коронарной артерии характеризовались более выраженным ответом на воздействие КФБ на уровне транскриптов в сравнении с ЭК внутренней грудной артерии. Хотя воздействие ИКФБ в большинстве случаев приводило к более выраженному увеличению экспрессии генов цитокинов в сравнении с СКФБ, на уровне белков эта зависимость от формы бионов не наблюдалась. Экспозиция СКФБ и ИКФБ приводила к повышению выделения ИЛ-6 обоими типами артериальных ЭК, в то время как повышенная секреция ИЛ-8 наблюдалась лишь при экспозиции ИКФБ ЭК внутренней грудной артерии.
Заключение. Добавление КФБ к культурам первичных артериальных ЭК способствует выделению этими клетками провоспалительных цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-8 в результате повышения экспрессии генов (IL6 и CXCL8 соответственно) независимо от формы КФБ (сферической или игольчатой).