Клонирование кДНК S100B в E. coli под контролем индуцибельного промотора, и ее гетерологичная экспрессия

  • M. K. Nurbekov Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», Москва, Россия
  • O. L. Terekhina Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», Москва, Россия
  • O. P. Dmitrenko Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Департамента здравоохранения города Москвы», Москва, Россия
  • A. V. Lobanov Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии», Москва, Россия; Филиал федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт биоорганической химии имени академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова» Российской академии наук, Пущино, Россия
  • N. N. Lobanova ООО «Церера», Пущино, Россия
Ключевые слова: гетерологичная экспрессия кДНК, рекомбинантный белок S100B, векторная система pBT7-N-His, стратегия клонирования и экспрессии, Genome compiler, фолдинг белка, дисульфидные связи, аналитическая и препаративная экспрессия белков, металл-аффинная хроматография белков

Аннотация

В работе разработана стратегия клонирования и экспрессии кДНК S100B с использованием эффективной и многофункциональной онлайн программы Genome compiler на основе векторной системы pBT7-N-His, имеющей промотор РНК-полимеразы фага Т7, участок клонирования и экспрессии с ключевыми элементами контроля и регуляции процессов транскрипции и трансляции. Экспрессия белка S100B подтверждена процедурой SDS-ПААГЭ по молекулярной массе выявленных на электрофорезе полос с динамикой накопления относительно контроля при увеличении времени инкубации после индукции с IPTG. Полученная гетерологичная экспрессия белка S100B с сохранением основных физико-химических свойств и биологической активностью открывает хорошие перспективы его применения в качестве информативного маркера состояний организме в норме и при патологии, и в качестве ценного объекта направленной терапии.

Опубликован
2018-12-11
Раздел
Краткие сообщения