Оптимизация стандартных протоколов субкультивирования мезенхимальных стволовых клеток первичной культуры костного мозга мышей

Аннотация

Особый интерес научного сообщества привлекает терапевтический и иммуномодулирующий потенциал мультипотентных мезенхимальных стволовых клетках (ММСК) костного мозга. В связи с этим поиск эффективной методики выращивания клеток данного типа является актуальной задачей для экспериментальной медицины.

Целью исследования стала оптимизация стандартных протоколов субкультивирования мышиных ММСК, получаемых из первичной культуры костного мозга.

Материалы и методы. Оценивался выход клеток при пассировании трипсином или аккутазой с помощью различных методик спустя 14 дней культивирования суспензий костного мозга мышей линии ICR в посевных концентрациях первичной культуры: 10, 15-20 и 30 млн клеток на 25 см².

Результаты. С помощью обработки в течение 15 мин 2 мл трипсина или 2 мл аккутазы удалось спассировать до 300 тыс адгезирующих и делящихся клеток при исходном посеве в 10 млн. По той же методике обработки удалось снять в 1,3–1,5 раза меньше клеток с посева в 15–20 млн за 15 мин и 30 млн клеток за 30 мин, а также культура значительно медленнее росла в 1-м пассаже

Заключение. Посевная плотность первичной культуры костного мозга в 10 млн клеток на 25 см² является оптимальной для получения адгезивной культуры мезенхимальных стволовых клеток мышей линии ICR. Субкультивирование с 2 мл трипсина или 2 мл аккутазы в течение 15 мин наиболее эффективно для получения первого пассажа.