Оценка митохондриальной дисфункции и эпителиально-мезенхимальной трансформации клеток пигментного эпителия сетчатки, индуцированных наносекундным лазерным облучением
DOI:
https://doi.org/10.48612/path/2310-0435.2026.03.36-42Ключевые слова:
возрастная макулярная дегенерация, ретинальный пигментный эпителий, наносекундный лазер 2RT, ДНК-кометы, МТТ-тест, эпителиально-мезенхимальная трансформация, пигментацияАннотация
Актуальность. Возрастная макулярная дегенерация (ВМД) является хроническим заболеванием сетчатки, приводящим к необратимой потере центрального зрения. Ключевым звеном патогенеза ВМД является дисфункция и гибель клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ). Наносекундный лазер 2RT рассматривается как перспективный метод лечения ранних стадий ВМД, однако вопросы его биологической безопасности на уровне клеток РПЭ остаются недостаточно изученными. Цель. Оценить повреждение ядерной ДНК, митохондриальную активность и эпителиально-мезенхимальную трансформацию клеток РПЭ человека после наносекундного лазерного воздействия в эксперименте in vitro.
Материалы и методы. Первичная культура клеток РПЭ выделена из 20 глаз (10 – с голубыми, 10 – с карими радужками) посмертных доноров. Клетки подвергали воздействию наносекундного лазера 2RT (527 нм, 3 нс, 200 мкм) с энергией от 0,10 до 0,60 мДж. Повреждение ДНК оценивали методом ДНК-комет через 24 часа. Митохондриальную активность оценивали с помощью МТТ-теста на сроках 24, 48, 72 часа и 7 суток. Экспрессию маркеров ЭМТ (виментин, α-SMA, ZO-1, RPE-65) оценивали иммуноцитохимическим методом через 7 суток.
Результаты. Для клеток от голубоглазых доноров подпороговые режимы (0,10–0,35 мДж) не вызывали повреждений ДНК (доля ДНК в хвосте менее 5%), сохраняли митохондриальную активность на уровне не менее 90% от контроля и не индуцировали ЭМТ. Для клеток от кареглазых доноров подпороговый диапазон был уже (0,10–0,30 мДж). При одинаковой энергии (0,40 мДж) повреждения ДНК у кареглазых были в 2 раза выше, а снижение митохондриальной активности – более выраженным, чем у голубоглазых.
Заключение. Подпороговые режимы 2RT лазера являются биологически безопасными по критериям сохранности ДНК, митохондриальной активности и отсутствия индукции ЭМТ. Клетки от кареглазых доноров более чувствительны к лазерному воздействию. Необходим дифференцированный подход к выбору энергии лазера с учётом пигментации РПЭ.
