Многоцветная флуоресцентная иммуногистохимическая окраска коры головного мозга человека
Аннотация
Разработан способ многоцветной флуоресцентной иммуногистохимической окраски посмортальных образцов мозга человека, позволяющий визуализировать на одном срезе до пяти маркеров одновременно. В связи с тем, что основной трудностью флуоресцентной иммуногистохимии нервной ткани человека является высокая автофлуоресценция фона, вызванная формальдегидной фиксацией и флуоресценцией липофусциновых гликолипопротеидов, целью работы было минимизировать автофлуоресценцию и, одновременно, усилить иммуногистохимический сигнал молекулярных маркеров белков интереса. В работе представлены результаты мультифлуоресцентной иммуногистохимической окраски 30 мкм срезов префронтальной коры человека с использованием антител к AQP1, CHBRN3, GFAP, визуализацией клеточных ядер и кровеносных сосудов. Показано, что мягкая формальдегидная фиксация и обработка 1% раствором судана черного В в 70% этиловом спирте, наряду с использованием растворов, блокирующих неспецифическое связывание антител, стрептавидиновых конъюгатов и AlexaFluor, снижают автофлуоресценцию фона, а испольщование вторичных и третичных систем детекции с флуоресцентными красителями AlexaFluor и стрептавидиновых конъюгатов усиливают специфический иммуногистохимический сигнал.
